色譜柱，更換新柱的標準

色譜工作者常會(hui) 碰到這樣的問題，什麽(me) 時候該換色譜柱了，色譜柱的塔板數能體(ti) 現色譜柱的狀態嗎？確定表明一支色譜柱應該“退休”的標準，從(cong) 經驗來看，當一支色譜柱的塔板數降低到新柱子時的百分之多少時就可以認為(wei) 該色譜柱不能再使用了呢，將塔板數作為(wei) 評價(jia) 色譜柱質量的唯一指標合適嗎?在您的實驗室裏是如何判斷一根色譜柱不可以再用了呢? 

　　塔板數是一個(ge) 粗略的指標，不能作為(wei) 評價(jia) 色譜柱的標準。通常使用塔板數來考察色譜係統：將新柱子接到儀(yi) 器上，根據色譜柱生產(chan) 商提供的測試條件測試該色譜柱，你應該得到和分析報告上同樣的結果。最差也應該得到比報告值低10%的塔板數。如果你所測得的塔板數遠遠低於(yu) 廠家提供的報告數據，這就說明你的色譜係統可能存在一些問題。進樣器、柱外效應、毛細連接以及檢測器都是容易出現問題的地方。

　　每個(ge) 色譜工作者都會(hui) 關(guan) 心分辨率，分辨率是考察一根色譜柱分離具體(ti) 樣品的好壞程度的指標。色譜的核心任務就是為(wei) 了使每個(ge) 峰完成分離，我們(men) 在實際工作中需要得到合理峰寬的窄峰以便獲得較低的檢測限

　　然而，我們(men) 需要考慮的另一個(ge) 因素是塔板數對分辨率的影響僅(jin) 僅(jin) 是平方根的關(guan) 係，這意味著當一根色譜柱的塔板數下降50%，分辨率僅(jin) 僅(jin) 下降7%。而當一根色譜柱塔板數下降為(wei) 新柱子一半的時候，你肯定看到了其它更加嚴(yan) 重的症狀告訴你這根色譜柱的壽命不長了。其實，大多數用戶僅(jin) 僅(jin) 使用色譜柱塔板數的一小部分。例如，對一支新的150mm×4.6mm，5mm粒徑的色譜柱來講，廠家測試報告上的塔板數為(wei) 14,000。使用下麵的公式可以估算一支色譜柱的塔板數

　　N=3000*L/Dp

　　L是色譜柱的柱長，以厘米為(wei) 單位;Dp是填料的粒徑，以微米為(wei) 單位

　　一支150mm×4.6mm，5mm粒徑的色譜柱的柱效大約為(wei) 9000，比廠家測試數據低30%。在實際的工作中，大多數色譜方法僅(jin) 僅(jin) 需要這些塔板數的一半，這些色譜方法還有優(you) 化的空間嗎?答案是肯定的。可見，色譜柱的塔板數不是分離中最重要的參數。

　　較好的方法是使用壓力、分辨率和峰形的混合指標來考察一根色譜柱的狀態。壓力的測量是最容易的，通常我們(men) 確定的色譜方法要滿足以下的要求：用新柱子時柱壓不高於(yu) 2500psi，在任何情況下壓力都不超過3000psi。盡管現代的液相色譜係統都可在更高的壓力下使用，但由於(yu) 高壓產(chan) 生的係統損耗和泄漏的問題會(hui) 很嚴(yan) 重。當壓力超過3000psi時，考慮更換進樣器和色譜柱之間的0.5mm孔徑的在線濾片。如果更換濾片後壓力仍然高，則色譜柱的濾片或者是色譜柱已經被汙染，這提示我們(men) 該換柱子了。有統計表明，超過60%的色譜柱損壞是由於(yu) 壓力過高的原因。

　　分辨率是我們(men) 考察色譜柱的一個(ge) 非常重要的指標，隻要兩(liang) 個(ge) 組分可以獲得基線分離，對該分析物的定量就不會(hui) 有什麽(me) 問題。對於(yu) 對稱的高斯峰來講，1.5的分辨率即可得到基線分離;若Rs在1.7至2.0之間則更好。若峰拖尾嚴(yan) 重則需要更高的分辨率。使用分辨率作為(wei) 色譜柱的評價(jia) 指標的好處在於(yu) 我們(men) 可以直觀地看到相鄰的峰的分離情況。

　　另外一個(ge) 考察色譜柱質量的標準是峰形拖尾情況，廠家測試報告的峰形都非常漂亮，但這並不代表該色譜柱分析實際樣品的情況。實際樣品中總是含有或多或少引起峰形拖尾的組分。最值得一提的是含有氮原子的化合物，這些化合物和矽膠骨架上的遊離矽羥基結合非常緊密，隨著色譜柱使用時間越長，鍵合相流失，拖尾則更加嚴(yan) 重。然而拖尾情況的改變不像分辨率的改變那樣能夠馬上看出來。基於(yu) 此，最好定一個(ge) 拖尾因子的上限，如美國藥典規定拖尾因子不超過1.8。

　　確定色譜柱“拋棄”標準的最佳時間是當我們(men) 開發分析方法或作方法認證的時候。通常，在開發分析方法的過程中你會(hui) 試驗幾根色譜柱，分析足夠多的實際樣品，你知道當分離變差的時候是什麽(me) 樣的情況。我傾(qing) 向於(yu) 在開始時使用一個(ge) 寬的範圍。我們(men) 的經驗是這樣的：你如果在開始時緊縮係統適用性要求，在方法認證後再放寬這個(ge) 要求是很困難的。在分析實際樣品之前進行係統適用性考察，以確保該色譜方法滿足分析者可以接受的標準。

 另外，色譜柱的性能除了與(yu) 固定相性能有關(guan) 外，還與(yu) 填充技術有關(guan) 。在正常條件下，填料粒度＞20µm時，幹法填充製備柱較為(wei) 合適；顆粒＜20µm時，濕法填充較為(wei) 理想。填充方法一般有4種：①高壓勻漿法，多用於(yu) 分析柱和小規模製備柱的填充；②徑向加壓法，Waters專(zhuan) 利；③軸向加壓法，主要用於(yu) 裝填大直徑柱；④幹法。柱填充的技術性很強，大多數實驗室使用已填充好的商品柱。